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白血病細(xì)胞株的凍存及復(fù)蘇

更新時(shí)間:2016-12-24      點(diǎn)擊次數(shù):2764
     白血病細(xì)胞株通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物也就是說,它是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。
    白血病細(xì)胞株的凍存及復(fù)蘇:
    白血病細(xì)胞株的凍存:為避免污染造成的損失,zui小化連續(xù)細(xì)胞系的遺傳改變和避免有限細(xì)胞系的老化和轉(zhuǎn)化,需要凍存哺乳細(xì)胞。凍存細(xì)胞前,細(xì)胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。
    有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細(xì)胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基,成分可能如下:
    ◆包含10%甘油的*培養(yǎng)基,
    ◆包含10%二甲基亞砜(DMSO)的*培養(yǎng)基,
    ◆50%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%甘油的新鮮培養(yǎng)基,或
    ◆50%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。
    對于無血清培養(yǎng)基,一些普通的培養(yǎng)基成分可能是:
    ◆50%細(xì)胞條件無血清培養(yǎng)基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基,或
    ◆包含有7.5%二甲基亞砜和10%細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。
    1.懸浮細(xì)胞
    ●計(jì)數(shù)將要凍存的活細(xì)胞。細(xì)胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。以大約200~400g離心5分鐘沉淀細(xì)胞,使用移液管移去上清到zui小體積,不要攪亂細(xì)胞。
    ●以1×107到5×107細(xì)胞/ml密度,在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細(xì)胞,或者以0.5×107到1×107在無血清培養(yǎng)基中,再次懸浮細(xì)胞。
    ●分裝進(jìn)凍存管,將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。
    ●細(xì)胞以1℃/分鐘進(jìn)行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。
    2.貼壁細(xì)胞
    ●使用分離試劑從基層分離細(xì)胞,分離時(shí)盡可能溫和,使對細(xì)胞的損傷減少到zui小。
    ●在*生長培養(yǎng)基中,再次懸浮分離細(xì)胞,確定有活力細(xì)胞數(shù)。
    ●以大約200g離心5分鐘沉淀細(xì)胞。使用移液管移去上清到zui小體積,不要攪亂細(xì)胞。
    ●以5×106到1×106細(xì)胞/ml密度,在凍存液中懸浮細(xì)胞。
    ●分裝進(jìn)凍存管,將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。
    ●細(xì)胞以1℃/分鐘進(jìn)行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。
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